A contaminación dos cultivos celulares pode converterse facilmente no problema máis común nos laboratorios de cultivos celulares, provocando ás veces consecuencias moi graves.Os contaminantes dos cultivos celulares pódense dividir en dúas categorías, contaminantes químicos como medio, impurezas de soro e auga, endotoxinas, plastificantes e deterxentes e contaminantes biolóxicos como bacterias, mofos, fermentos, virus, infeccións cruzadas por micoplasmas.Contaminado por outras liñas celulares.Aínda que é imposible eliminar completamente a contaminación, a súa frecuencia e gravidade pódense reducir coñecendo a fondo a súa orixe e seguindo boas técnicas asépticas.
1.Esta sección describe os principais tipos de contaminación biolóxica:
Contaminación bacteriana
Contaminación por mofos e virus
Contaminación por micoplasmas
Contaminación por lévedos
1.1 Contaminación bacteriana
As bacterias son un gran grupo de microorganismos unicelulares ubicuos.Adoitan ter unhas poucas micras de diámetro e poden ter unha variedade de formas, desde esferas ata varillas e espirais.Debido á súa ubicuidade, tamaño e rapidez de crecemento, as bacterias, xunto cos fermentos e os mofos, son os contaminantes biolóxicos máis comúns no cultivo celular.
1.1.1 Detección de contaminación bacteriana
A contaminación bacteriana detéctase facilmente mediante a inspección visual do cultivo aos poucos días de infectarse;
Os cultivos infectados adoitan aparecer turbios (é dicir, turbios), ás veces cunha fina película na superficie.
Tamén se atopan con frecuencia caídas bruscas do pH do medio de cultivo.
Baixo un microscopio de baixa potencia, as bacterias aparecen como pequenos gránulos móbiles entre as células, e a observación nun microscopio de alta potencia pode resolver as formas das bacterias individuais.
1.2 Contaminación por mohos e virus
1.2.1 Contaminación por mofos
Os mofos son microorganismos eucariotas do reino dos fungos que crecen en forma de filamentos pluricelulares chamados hifas.As redes conectivas destes filamentos pluricelulares conteñen núcleos xeneticamente idénticos chamados colonias ou micelio.
Do mesmo xeito que a contaminación por lévedos, o pH do cultivo mantense estable durante a fase inicial de contaminación e despois aumenta rapidamente a medida que o cultivo se infecta máis gravemente e vólvese turbio.Ao microscopio, o micelio adoita ser filamentoso, ás veces como densos grupos de esporas.As esporas de moitos mofos poden sobrevivir en ambientes extremadamente duros e inhóspitos durante a súa fase de inactividade e só se activan cando se atopan as condicións de crecemento adecuadas.
1.2.2 Contaminación por virus
Os virus son axentes infecciosos microscópicos que se apoderan da maquinaria da célula hóspede para a súa reprodución.O seu tamaño extremadamente pequeno dificulta a súa detección en cultivo e a súa eliminación dos reactivos utilizados nos laboratorios de cultivo celular.Dado que a maioría dos virus teñen requisitos moi estritos para os seus hóspedes, normalmente non afectan negativamente aos cultivos celulares de especies distintas do hóspede.
Non obstante, o uso de cultivos celulares infectados con virus pode supoñer un serio risco para a saúde do persoal do laboratorio, especialmente se no laboratorio se cultivan células humanas ou de primates.
A infección viral en cultivos celulares pódese detectar mediante microscopía electrónica, inmunotinción cun conxunto de anticorpos, ELISA ou PCR con cebadores virais axeitados.
1.3 Contaminación por micoplasmas
Os micoplasmas son bacterias simples sen paredes celulares e pénsase que son os organismos autorreplicantes máis pequenos.Debido ao seu tamaño extremadamente pequeno (normalmente menos de 1 micra), os micoplasmas son difíciles de detectar ata que alcanzan densidades extremadamente altas e provocan o deterioro dos cultivos celulares;Ata entón, normalmente non hai ningún sinal evidente de infección.
1.3.1 Detección da contaminación por micoplasmas
Algúns micoplasmas de crecemento lento poden persistir en cultivos sen causar morte celular, pero alteran o comportamento e o metabolismo das células hóspedes nos cultivos.
A infección crónica por micoplasma pode caracterizarse por unha redución da taxa de proliferación celular, unha diminución da densidade de saturación e aglutinación no cultivo en suspensión.
Non obstante, a única forma fiable de detectar a contaminación por micoplasmas é probar o cultivo regularmente mediante tinción fluorescente (por exemplo, Hoechst 33258), ELISA, PCR, inmunotinción, autorradiografía ou probas microbianas.
1.4 Contaminación por lévedos
Os lévedos son eucariotas unicelulares do reino dos fungos, cuxo tamaño varía desde unhas poucas micras (xeralmente) ata 40 micras (raramente).
1.4.1Detección de contaminación por lévedos
Do mesmo xeito que coa contaminación bacteriana, os cultivos contaminados con lévedos poden volverse turbios, especialmente se a contaminación está en fase avanzada.O pH dos cultivos contaminados con lévedos cambia moi pouco ata que a contaminación se fai máis grave, momento no que o pH adoita aumentar.Ao microscopio, a levadura aparece como partículas individuais ovoides ou esféricas e pode producir partículas máis pequenas.
2.Infección cruzada
Aínda que non é tan común como a contaminación microbiana, a contaminación cruzada extensa de moitas liñas celulares con HeLa e outras liñas celulares de rápido crecemento é un problema claramente definido con graves consecuencias.Obter liñas celulares de bancos celulares reputados, comprobar regularmente as características das liñas celulares e utilizar boas técnicas asépticas.Estas prácticas axudarán a evitar a contaminación cruzada.A pegada da ADN, o cariotipo e a isotipificación poden confirmar se hai contaminación cruzada no seu cultivo celular.
Aínda que non é tan común como a contaminación microbiana, a contaminación cruzada extensa de moitas liñas celulares con HeLa e outras liñas celulares de rápido crecemento é un problema claramente definido con graves consecuencias.Obter liñas celulares de bancos celulares reputados, comprobar regularmente as características das liñas celulares e utilizar boas técnicas asépticas.Estas prácticas axudarán a evitar a contaminación cruzada.A pegada da ADN, o cariotipo e a isotipificación poden confirmar se hai contaminación cruzada no seu cultivo celular.
Hora de publicación: 01-feb-2023